Tecnici Preparare una sospensione cellulare con 20 milioni di cellule per ml in 0,1 per cento di siero fetale bovino ( FBS ) e tampone fosfato ( PBS ) . Essi aggiungono CFSE e lasciate riposare la sospensione per otto minuti , secondo l'Università del Kansas Medical Center . FBS preriscaldata viene poi aggiunto e le cellule sono incubate in un bagno d' acqua a 98,6 gradi Fahrenheit per 10 minuti . Cellule sono poi centrifugati per cinque minuti , supernatante viene scartato e le cellule vengono lavate in una soluzione di 2 percento FBS /PBS per tre volte . Le cellule vengono fissate con paraformaldeide .
Semplificate CFSE Protocollo di colorazione
Tecnici centrifugare i campioni di sangue , eliminando le cellule rosse . Più tardi , si lavano i linfociti con PBS per rimuovere proteine libero . Per essere in grado di osservare la divisione cellulare dopo due giorni , si aggiunge CFSE in basse concentrazioni per otto minuti, quindi la reazione viene bloccata con siero fetale di vitello . Cellule vengono lavate due volte con PBS /FCS . Questo protocollo può essere utilizzato in " in vivo " e " in vitro" esperimenti , secondo The Lab Hedrick presso l'Università della California .
Protocollo per l' attivazione di cellule T CD8 Naive in vitro
una cellula T naive è un linfocita , che ha differenziato nel midollo osseo . Questo tipo di cella è considerato maturo , e le cellule rispondono a nuovi agenti patogeni che il sistema immunitario non ha mai incontrato. Tecnici incubare virus dell'influenza e campioni di cellule in ghiaccio per 30 minuti , centrifugare e continuare il processo di incubazione per 18 ore a 98,6 gradi Fahrenheit. Successivamente , le cellule sono colorate con CFSE e risultati sono analizzati in citometria a flusso.
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